Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa cho Enzyme Acetylcholinesterase trong hệ biểu hiện E.coli

Hóa học & Kỹ thuật môi trường

NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA CHO ENZYME

ACETYLCHOLINESTERASE TRONG HỆ BIỂU HIỆN E.coli

Nghiêm Ngọc Hoa¹, Đặng Thị Quỳnh¹, Phạm Thị Thu Hường²,

Nguyễn Thị Vân Anh², Tô Văn Thiệp¹, Nguyễn Văn Hoàng¹, Phạm Kiên Cường^1*.

Tóm tắt: Acetylcholinesterase (AChE) là một enzyme quan trọng tham gia vào hệ

thống dẫn truyền tín hiệu thần kinh, có mặt rộng rãi ở hầu hết các loài động vật.

Chức năng chính của AChE là giới hạn tác dụng truyền đạt xung thần kinh tại vị trí

các khớp thần kinh. Điều này được thực hiện nhờ quá trình thủy phân Acetylcholine

dưới sự xúc tác của AChE, tạo thành Choline (ChOH) và axit axetic. Ứng dụng quan

trọng của AChE là dùng để sản xuất ra các phương tiện phát hiện nhanh thuốc trừ

sâu bảo vệ thực vật họ phospho hữu cơ trong môi trường, nông sản, rau quả. Trong

nghiên cứu này, gen mã hóa cho acetylcholinesterase đã được nhân bản bằng PCR

và nhân dòng vào vector pTOP-TA-V2 để tạo ra vector nhân dòng pTOP-AChE.

Tiếp theo, gen mã hóa enzyme AChE từ vector pTOP-AChE được chuyển vào vector

biểu hiện pET43a, để tạo ra vector biểu hiện pET43a-AChE. Vector này được biến

nạp vào chủng E.coli DH5α tạo nên dạng tái tổ hợp DH5α-pET43a-AchE. Sự biểu

hiện của gen mã hóa enzyme AchE đã được kiểm tra bằng phương pháp điện di và

thẩm tích miễn dịch.

Từ khóa: Acetylcholinesterase, Biểu hiện, Tái tổ hợp.

1. MỞ ĐẦU

Acetylcholinesterase là một enzyme quan trọng tham gia vào hệ thống dẫn

truyền tín hiệu thần kinh, có mặt rộng rãi ở hầu hết các loài động vật [10, 11, 13].

Chức năng chính của enzyme acetylcholinesterase là giới hạn tác dụng truyền đạt

xung thần kinh tại vị trí các khớp thần kinh [11]. Một trong những ứng dụng quan

trọng của enzyme acetylcholinesterase là dùng để sản xuất ra các phương tiện phát

hiện nhanh nhóm chất độc thần kinh, thuốc trừ sâu bảo vệ thực vật họ phospho hữu

cơ [7]. Do có nhiều ứng dụng trong đời sống, trên thế giới, AChE được nghiên cứu

tách chiết từ rất sớm. Để đạt được độ tinh sạch và hoạt độ phù hợp cho các mục

đích khác nhau, các nhà khoa học đã tập trung nghiên cứu tinh sạch enzyme AChE

từ các nguồn khác nhau [3-6]. Tuy nhiên việc tách chiết enzyme

acetylcholinesterase bằng các quy trình khác nhau đều có những hạn chế nhất định

về hiệu suất, hoạt độ riêng. Một số nhược điểm như độ ổn định thấp, phụ thuộc

nhiều vào nguồn nguyên liệu, nên khó sản xuất với quy mô lớn. Do đó, các nhà

khoa học đã tập trung nghiên cứu biểu hiện enzyme acetylcholinesterase dưới dạng

tái tổ hợp nhằm thu nhận được một lượng lớn dùng cho mục đích phân tích hoặc trị

liệu cũng như nghiên cứu [8, 12, 14].

Ở Việt Nam, chưa có nhiều công trình nghiên cứu sản xuất enzym

eacetylcholinesterase tái tổ hợp. Một số công trình nghiên cứu chủ yếu tập trung

vào việc tách chiết enzyme này từ các nguồn tự nhiên (thực vật, động vật và vi

sinh vật), khảo sát các tính chất lý-hóa và hoạt tính sinh học của chúng [1, 2].

Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã nhân dòng gen mã hóa cho enzyme AChEvào

vector pET43a và biểu hiện ở E. coli.

2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP

2.1. Nguyên liệu và hóa chất

194

N. N. Hoa, …, P. K. Cường,“Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa … hệ biểu hiện E.coli.”

Nghiên cứu khoa học công nghệ

Chủng E. coli DH5α, BL21 (DE3) RIL được mua từ hãng Invitrogen.

Hỗn hợp dNTP, thang chuẩn DNA được mua từ hãng Thermofisher; Taq

DNA polymerase,enzyme giới hạn được mua từ hãng Enzynomics, T4 DNA ligase

của hãng Promega, bộ kit tinh sạch plasmid của hãng Bioneer và kit đọc trình tự

của hãng Beckman Coulter.

Các hóa chất còn lại đều đạt độ tinh sạch dành cho phân tích và được mua từ

các hãng tin cậy (Sigma, Merk…).

2.2. Thiết bị

Máy PCR( Bio – Rad, Singapore), máy điện di (Cleaver - Anh), hệ thống phân

tích hình ảnh (Biorad – Italia), máy đo quang phổ Halo RB (RB – 10), máy ly tâm

lạnh (Sigma – Đức), tủ ấm (Memer – Đức), máy đo pH (Mettle toledo), máy lắc

(Big bill, Mĩ).

2.3. Phương pháp, kĩ thuật nghiên cứu

2.3.1. Xác định hàm lượng protein

Hàm lượng protein được xác định theo phương pháp đo mật độ quang ở bước

sóng λ=280 nm và theo phương pháp của Lowry và cộng sự [9] với tinh thể

albumin huyết thanh bò làm đường chuẩn.

2.3.2. Xác định hoạt độ Acetylcholinesterase

Hoạt tính của Acetylcholinesterase được xác định theo Kit của Biovision. Một

đơn vị hoạt tính được xác định là lượng enzyme cần thiết để thủy phân 1µmol cơ

chất ACh trong 1 phút ở 37⁰C với chất chỉ thị màu AChE probe, đo ở bước sóng

λ= 570 nm.

2.3.3. Nhân dòng đoạn gen mã hóa enzyme acetylcholinesterase

Gen mã hóa cho enzyme acetylcholinesterase được nhân bản trực tiếp

bằngphương pháp PCR. Đoạn mồi được sử dụng trong phản ứng PCR này có chứa

trình tự nhận biết của enzyme EcoRI (AChE-Fw:5’-

TGGACCGAATTCATGAGGCCCCCGTGGTGTC-3’) và enzyme XhoI (AChE-

Rv:5’-GTGGTGCTCGAGTCACAGGTCTGAGCAGCGATCC-3’)

PCR chứa 1xTaq polymerase buffer, 2 mM MgCl₂, 0,2 mM dNTPs, và 2,5

đơn vị Taqpolymerase với tổng thể tích cuối là 25 µl. Quá trình nhân bản được

tiến hành bởi máy GeneAmp PCRSystem 9700 với 1 vòng ở 95^oC trong 5 phút

để khởi động nóng, tiếp theo là 35 chu kì gồm 30 giâyở 95^oC, 45 giâyở 60^oC, và

2 phút ở 72^oC, tiếp theo là kéo dài ở 72^oC trong 7 phút và bảo quản ở 4^oC cho

đến khi sử dụng.

Sản phẩm PCR sau khi được tạo thành được gắn vào vector pTOP-TA-V2 nhờ

kit ligase (kit TOP cloner ^TMTA core), và được biến nạp vào E. coli DH5α. Các

khuẩn lạc dương tính mang vector nhân dòng được phát hiện bằng phương pháp

PCR sử dụng trực tiếp khuẩn lạc làm nguồn cho DNA khuôn với cặp mồi đặc hiệu

cho đoạn gen AChE (AChE Fw, AChE Rv). Sản phẩm PCR được kiểm tra bằng

điện di trên gel agarose 1%. Trình tự nucleotide được xác định theo phương pháp

Sanger trên máy đọc trình tự CEQ 8000 (Beckman Coulter).

2.3.4. Biểu hiện gen mã hóa enzyme acetylcholinesteraseở E. coli

Plasmid tái tổ hợp pTOP mang gen mã hóa enzyme acetylcholinesterase và

vector pET43ađược tinh sạch theo kit Qiagen, cùng được xử lý bằng enzyme giới

hạn XhoI và EcoRI,sản phẩm cắt sau khi điện di kiểm tra, được tinh sạch nhằm thu

195

Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số 54, 04 - 2018

Hóa học & Kỹ thuật môi trường

được AChE và vector pET43a. Phản ứng gắn được thực hiện ở 4⁰C, qua đêm, sử

dụng T4 DNA ligase (Promega). Vector tái tổ hợp mang gen mã hóa enzyme

acetylcholinesterase ký hiệu là pET43a-AChE được biến nạp vào tế bào E. coli

chủng BL21 (DE3) RIL và được nuôi cấy trong môi trường Luria Bertani (LB) có

chứa ampicillin50 g/ml, chloramphenicol 34 g/ml. Sinh tổng hợp enzyme

acetylcholinesterase được cảm ứng bằng IPTG 1mM.

2.3.5. Thu dịch chiết tế bào và kiểm tra sự biểu hiện của enzyme

acetylcholinesterase ở E. coli

Sinh khối tế bào thu nhận bằng ly tâm từ 100 ml dịch nuôi cấy và được hòa

trong 1 ml đệm Tris-HCl 50 mM, pH 8,0 có chứa NaCl 200 mM, PMSF 1mM,

Triton X-100 0,1%, Imidazol 5 mM, DTT 1 mM (đệm A), huyền dịch được làm

lạnh trên đá và cho siêu âm 3 chu kỳ, mỗi chu kỳ 30 giây để phá vỡ các tế bào.

Hỗn hợp sau đó được ly tâm ở 14.000 vòng/phút, 4⁰C trong 20 phút để thu dịch

chiết tế bào. Sự có mặt của enzyme acetylcholinesterase được đánh giá bằng

phương pháp điện di trên gel polyacrylamide có SDS (SDS-PAGE).

3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

3.1. Nhân bản đoạngen mã hóa enzyme acetylcholinesterase

Đoạn gen mã hóa enzyme acetylcholinesterase được nhân bản bằng PCR với

cặp mồi AChE-Fw, AChE-Rvsử dụng plasmid pGEMT-AChE làm khuôn. Kết quả

thu được (Hình 1) cho thấy sự có mặt băng DNA nhân bản kích thước khoảng

1,8kb, tương ứng với kích thước của đoạn gen AChE (đường chạy 1,2,3), Trong

khi đó, mẫu đối chứng âm thì không có băng DNA nhân bản nào chứng tỏ chúng

tôi đã nhân bản thành công đoạn gen mã hóa cho enzyme acetylcholinesterase với

cặp mồi AChE-Fw, AChE-Rv.

Hình 1. Nhân dòng gen AChE vào plasmid pTOP TA-V2.

A) Điện di sản phẩm PCR nhân bản gen AchE trên gel agarose 1%

M: Thang chuẩn DNA 1kb; (-) Sản phẩm PCR từ đối chứng âm (không có

DNA); 1,2,3: Sản phẩm PCR sử dụng pGEMT-AChE làm khuôn

3.2. Nhân dòng gen mã hóa enzyme acetylcholinesterase vào vector pTOP

Sản phẩm PCR đoạn gen AChE (1,8kb) được gắn trực tiếp vào vector nhân

dòng pTOP, biến nạp vào tế bào E. coli chủng DH5α và các tế bào biến nạp được

196

N. N. Hoa, …, P. K. Cường,“Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa … hệ biểu hiện E.coli.”

Nghiên cứu khoa học công nghệ

nuôi cấy trên môi trường LB chứa ampicillin 50 g/ml. Tiếp theo, chúng tôi đã

chọn ngẫu nhiên 4 khuẩn lạc để kiểm tra sự có mặt của đoạn gen nhân dòng bằng

phương pháp PCR sử dụng cặp mồi pTOP Fw/Rv được thiết kế đặc hiệu cho

vector pTOP. Theo tính toán lý thuyết, nếu vector có mang đoạn gen AChE thì sản

phẩm PCR thu được sẽ có kích thước khoảng 2,1kb, bao gồm kích thước của đoạn

gen AChE khoảng 1,8 kb cộng với kích thước đoạn DNA nằm giữa 2 mồi trên

vector pTOP là 0,3 kb.

Kết quả điện di trên gel agarose 1% sản phẩm PCR sử dụng DNA từ 4 khuẩn

lạc trắng làm khuôn cho thấy các sản phẩm PCR từ khuẩn lạc trắng đều cho băng

DNA có kích thước khoảng 2,1 kb (các đường chạy 1-4). Khi PCR với cặp mồi đặc

hiệu AChE Fw/Rv (hình 2) cho thấy, sản phẩm PCR từ khuẩn lạc trắng cho băng

DNA kích thước khoảng 1,8 kb tương đương với kích thước gen mã hóa enzyme

AChE (đường chạy 7-10). Như vậy, chúng tôi đã thu được các khuẩn lạc mang

plasmid tái tổ hợp vector pTOP có chứa đoạn gen nhân bản có kích thước khoảng

1,8 kb đặc hiệu cho AChE. Vì vậy, có thể kết luận đã nhân dòng thành công đoạn

gen mã hóa AChE vào vector pTOP.

Hình 2. Kết quả điện di sản phẩm PCR khuẩn lạc kiểm tra vector pTOP-AChE.

M: Thang chuẩn DNA 1kb

1- 4: Khuẩn lạc PCR với Mồi pTOP Fw/Rv

5,6: Đối chứng âm

7- 10: Khuẩn lạc PCR với Mồi AChE Fw/Rv

3.3. Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa enzyme acetylcholinesterase trong

pET43a

Để thiết kế vector biểu hiện gen mã hóa AChE, vector pET43a được sử

dụng.Xử lý vector pTOP-AChE và vector pET43a bằng XhoI và EcoRI,sản phẩm

cắt sau khi điện di kiểm tra (hình 3, 4) được tinh sạch nhằm thu được AChE và

vector pET43a. Sản phẩm tinh sạch được đem đi ligase bằng T4 ligase, để 4^oC qua

đêm. Sau đó, sản phẩm ligase được đem đi biến nạp vào E. coli DH5α chọn lọc các

197

Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số 54, 04 - 2018

Hóa học & Kỹ thuật môi trường

khuẩn lạc trên môi trường chứa Ampicillin 50 g/ml. Plasmid từ khuẩn lạc được

tách ra và kiểm tra sự có mặt của gen mã hóa AChE bằng PCR với 2 cặp mồi T7

promoter và T7 terminator của vector pET43a và cặp mồi AChE Fw/Rv. Kết quả

điện di sản phẩm PCR thu được ở hình 5 cho thấy, khi sử dụng cặp mồi T7 của

vector pET43a, sản phẩm PCR cho băng DNA có kích thước khoảng 2,1 kb (bằng

kích thước 1,8 kb của đoạn gen mã hóa AChE cộng với đoạn 300 bp của vector),

còn khi sử dụng cặp mồi AChE Fw/Rv cho băng DNA có kích thước khoảng 1,8

kb (kích thước của riêng đoạn gen mã hóa cho AChE).

Hình 3. Ảnh điện di

Hình 4. Ảnh điện di

Hình 5. Kết quả PCR kiểm

sản phẩm cắt plasmid sản phẩm cắt plasmid

tra plasmid pET43a-AChE.

pET43a với enzyme

giới hạnECoRI và

XhoI.

pTOP – AChE với

enzyme giới hạn

EcoRI và XhoI.

1: Thang chuẩn DNA 1kb; 2:

Đối chứng âm; 3: Plasmid

pET43a-AChEkiểm tra với

M: 1 kb DNA

M: 1kb DNA marker; mồi T7 Fw/Rv; 4: Plasmid

marker; 1: plasmid

pET43a nguyên bản;

2: plasmid pET43a

cắt với enzyme giới

hạn ECoRI và XhoI.

1: plasmid pTOP-

AChE nguyên bản; 2:

plasmid pTOP-AChE

cắt với enzyme giới

hạn ECoRI và XhoI.

pET43a-AChEkiểm tra với

mồi AChE Fw/Rv.

Kết quả này chứng tỏ đã gắn thành công đoạn gen mã hóa AChE vào pET43a

và plasmid tái tổ hợp này được ký hiệu là pET43a-AChE.

Chúng tôi cũng đã tiến hành đọc trình tự để khẳng định việc gắn đoạn gen mã

hóa cho AChE vào vector là đúng vị trí và khung đọc. Để biểu hiện gen mã cho

AChE, vector pET43a-AChE được biến nạp vào tế bào E. coli chủng BL21 RIL và

cấy trải trên môi trường LB có chứa Ampicillin 50 μg/ml và chloramphenicol 34

μg/ml. Nhằm kiểm tra khả năng biểu hiện AChE bằng vector pET 43a ở E. coli,

dịch chiết sinh khối tế bào đã đượcđiện di trên gel polyacrylamide 12% có chứa

SDS kết quả thu được như hình 6.

198

N. N. Hoa, …, P. K. Cường,“Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa … hệ biểu hiện E.coli.”

Nghiên cứu khoa học công nghệ

Hình 6. Điện di gel polyacrylamide có SDS kiểm tra sự biểu hiện

của AChE ở E. coliBL21 DE3.

M: Thang chuẩn protein;

1,2,3,4: dịch chiết tổng số tế bào E. coli BL21 DE3 mang vector pET43a -

AChE; 5,6,7,8: dịch chiết tổng số tế bào E. coli không mang vector pET43a -

AChE.

Kết quả SDS-PAGE cho thấy dịch chiết tổng số tế bào E. coli BL21 DE3 mang

vector pET43a - AChE xuất hiện băng protein với khối lượng phân tử khoảng 68kDa

tương ứng với kích thước AChE tái tổ hợp tính toán lý thuyết, trong khi đó dịch chiết

tổng số tế bào E. coli không mang vector pET43a - AChE không xuất hiện băng

protein có kích thước khoảng 68kDa. Do đó, chúng tôi bước đầu khẳng định vi

khuẩn E. coli BL21 DE3 đã biểu hiện được enzyme AChE tái tổ hợp.

Kết quả xác định hoạt tính protein AChE tái tổ hợp thu được trong dịch chiết

protein tổng số có hoạt độ riêng (U/mgpr) là 6,94.

4. KẾT LUẬN

Chúng tôi đã nhân dòng gen AChE vào hệ thống vector biểu hiện pET43a và

chuyển thành công vào hệ thống sinh vật biểu hiện E. coli BL21 DE3. AChE tái tổ

hợp có kích thước khoảng 68 kDa có hoạt độ là 6,94 U/mgprotein.

Lời cảm ơn: Công trình này được hoàn thành với sự hỗ trợ kinh phí từ đề tài

nghiên cứu khoa học công nghệ cấp Viện Khoa học và Công nghệ quân sự với tên

gọi "Nghiên cứu ứng dụng công nghệ tái tổ hợp ADN trong sản xuất

enzymeacetylcholinesterase (EC 3.1.1.7) phục vụ mục đích phân tích phát hiện

chất độc cơ phôt pho".

.

TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1]. Lê Minh Trí. (2005), “Nghiên cứu khai thác và ứng dụng enzyme

acetylcholinesterase chẩn đoán chất độc phospho hữu cơ”, Luận văn thạc sỹ

khoa học, Trường Đại học Khoa học Tự Nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội.

199

Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số 54, 04 - 2018

Hóa học & Kỹ thuật môi trường

[2]. Lê Minh Trí. (2010), “Nghiên cứu tinh sạch, tính chất đặc trưng và ứng dụng

của acetylcholinesterase từ ốc bươu vàng”, Luận án tiến sĩ sinh học, Trường

Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc gia Hà Nội.

[3]. Aliriz S., Turkoglu V. (2003), “Purification and characterization of

acetylcholinesterase from the Lake Van fish” (Chalcalburnus tarichii Pallas,

1811), Prep Biochem Biotechnol, Vol. 33(2), pp. 137-45.

[4]. Askar K.A., Kudi A.C. & Moody A.J. (2011), “Purification of soluble

acetylcholinesterase from sheep liver by affinity chromatography”, Applied

Biochemistry and Biotechnology, Vol. 165, pp. 336–346.

[5]. Assis C.R., Castro P.F., Amaral I.P., Carvalho E.V., Carvalho L.B., Bezerra

R.S. (2010), “Characterization of acetylcholinesterase from the brain of the

Amazonian tambaqui (Colossoma macropomum) and in vitro effect of

organophosphorus and carbamate pesticides”, Environmental Toxicology

and Chemistry, Vol. 29(10), pp. 2243-8.

[6]. Augustinsson K.B. (1948), “Cholinesterases, a study in comparative

enzymology”, Acta Physiologica Scandinavica, Vol. 15(Suppl 52), pp. 1–182.

[7]. Harel M., Kryger G., Rosenberry T.L., Mallender W.D., Lewis T., Fletcher

R.J., Guss J.M., Silman I., Sussman J.L. (2000), “Three-dimensional structures

of Drosophila melanogaster acetylcholinesterase and of its complexes with two

potent inhibitors”, Protein Sci. 2000 Jun; 9(6): 1063–1072.

[8]. Jingquan L. Q., Jun Y., Songjie W., Fangfang Zh., Songci X., Junyang L.,

Joelle K. S., Wei Zh., Hui W. (2013), “Surface Display of Recombinant

Drosophila melanogaster Acetylcholinesterase for Detection of Organic

Phosphorus and Carbamate Pesticides”, PLoS ONE 8(9): e72986.

doi:10.1371/journal.pone.0072986.

[9]. Lowry H.O., Rosebrough J.N., Farr A.L., Randall R.J. (1951), “Protein

measurement with the folin phenol reagent”. Department of Pharmacology,

Washington University School of Medicine.

[10]. Paulus J.M., Maigne J., and Keyhani E. (1981), “Mouse megakaryocytes

secrete acetylcholinesterase”, Blood, Vol. 58, pp. 1100–1106.

[11]. Taylor P. (1991), “The cholinesterase”. J Biol Chem. 1991 Mar 5;266(7):

4025–4028.

[12]. Vincenzo T., Marta G., Martine A., Elvio G., Rita R., Gabriella R. (1999),

“Molecular Cloning and Expression of a Full-Length cDNA Encoding

Acetylcholinesterase in Optic Lobes of the Squid Loligo opalescens”.

Department of Experimental Medicine, Division of Molecular and Cell

Biology, University of Perugia, Perugia, Italy; and Differenciation Cellulaire

et Croissance, INRA, Montpellier, France.

[13]. Zajicek J. (1957), “Studies on the histogenesis of blood platelets and

megakaryocytes”, Acta physiologica Scandinavica, Vol. 40, pp. 1–32.

[14]. Zhifan Y., Jun Ch., Yonggin Ch., Sijing J. (2010), “Molecular cloning and

characterization of an Acetylcholinesterase cDNA in the Brown Planthopper,

Nilaparvata lugens”. J Insect Sci. 2010; 10: 102.

200

N. N. Hoa, …, P. K. Cường,“Nghiên cứu biểu hiện gen mã hóa … hệ biểu hiện E.coli.”

Nghiên cứu khoa học công nghệ

ABSTRACT

EXPRESSION OF A GENE ENCODING

ACETYLCHOLINESTERASE ENZYME IN E.coli

Acetylcholinesterase (AChE) is an important enzyme, involved in the

neurotransmitter system, which is widespread in most animals. The main

function of AChE is to limit the effect of transmitting nerval impulses at

the synapse site. This is accomplished by the hydrolysis of acetylcholine

under the catalysis of AChE, forming choline and acetic acid. The

important use of AChE is toproduce vehicles for the rapid detection of

organophosphorus insecticides in the environment, agricultural products,

and vegetables. In this study, the gene encoding for acetylcholinesterase

was cloned by PCR and cloned into the pTOP-TA-V2 vector to generate

pTOP-AChE lineage vector. Next, the AChE gene from the pTOP-AChE

vector was transposed into the expression vector pET43a, to generate the

pET43a-AChE expression vector. This vector is transformed into the E.

coli DH5α strain that forms the recombinant DH5α-pET43a-AChE. The

expression of the gene encoding enzyme AchE has been tested by

electrophoresis and Western blotting analysis.

Keywords: Acetylcholinesterase, Expression, Recombinant.

Nhận bài ngày 13 tháng 9 năm 2017

Hoàn thiện ngày 08 tháng 3 năm 2018

Chấp nhận đăng ngày 10 tháng 4 năm 2018

Địa chỉ: ¹Viện Công nghệ mới/Viện Khoa học và Công nghệ Quân sự;

²Trường Đại học Khoa học Tự nhiên/Đại học Quốc gia Hà Nội.

^*Email: [email protected].

201

Tạp chí Nghiên cứu KH&CN quân sự, Số 54, 04 - 2018