Bài giảng Tổng quan về FISH
I. Tổng quan về FISH
❖FISH (fluorescence in situ hydridization) – kĩ thuật lai huỳnh quang tại chỗ.
❖Là sự kết hợp chính xác của phép lai 1 đoạn oligonucleotit ( đầu dò) có gắn
tín hiệu huỳnh quang với 1 trình tự ADN đích đặc trưng
❖Bằng quan sát trực quan từ kính hiển vi huỳnh quang, các phân tử huỳnh
quang phát sáng với những màu sinh động cho phép hiển thị các đoạn ADN ,
nhiễm sắc thể hay tế bào đích
❖Có thể nhận dạng, liệt kê và định vị các tế bào sinh vật trong mẫu môi
trường tự nhiên hay trong các mô bệnh phẩm
II. Quy trình thực hiện
FISH dò tìm và phát hiện ra các trình tự acid nucleic của các loài vi
sinh vật mong muốn bằng cách dùng đầu dò được đánh dấu huỳnh
quang lai đặc hiệu với các trình tự đích đặc hiệu bổ sung với nó bên
trong tế bào nguyên vẹn (không cần phá vỡ tế bào).
1. Chuẩn bị đầu dò:
• lựa chọn đầu dò và lựa chọn thuốc nhuộm huỳnh quang
2. Chuẩn bị mẫu.
❖Lựa chọn đầu dò
• Đầu dò: là những
oligonucleotide dài từ
15-30 bp được tạo từ
một thiết bị tổng hợp
tự động, có trình tự bổ
sung với các rRNA 16s
của tế bào sinh vật.
• Xem xét đến tính đặc
hiệu, độ nhạy & khả
năng xâm nhập vào tế
bào
❖Lựa chọn đầu dò
• rARN 16S: ổn định về mặt di truyền, số lượng bản sao nhiều và cấu
trúc được bán bảo tồn -> nhận biết và định danh các loài vi sinh vật
trở nên dễ dàng hơn .
❖Đánh dấu huỳnh quang
(a) Đánh dấu đầu 5’
(b) gắn các nucleotide đầu 3’
DIG
(c) Dùng chất chỉ thị
TSA
HRP
(d) đánh dấu bằng enzym
(e) đầu dò
polyribonucleotide
Bảng 1: Một số thuốc nhuộm được sử dụng để dò tìm vi sinh vật bằng
phương pháp FISH
Chuẩn bị mẫu
Mẫu chứa vsv &
đầu dò
Chất tạo tủa:
ethanol
(methanol)
8 trang
24680
Free
Bạn đang xem tài liệu "Bài giảng Tổng quan về FISH", để tải tài liệu gốc về máy hãy click vào nút Download ở trên
File đính kèm:
- bai_giang_tong_quan_ve_fish.pptx
